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本试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取组蛋白。提取过程简单方便。

组蛋白提取产物的产量大约0.4mg每10⁷个细胞或100mg组织，不同的细胞和组织中，产量差异很大。

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、组蛋白修饰实验比如乙酰化、甲基化、sumoylation等下游蛋白研究。

• 使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃保存，开盖使用后-20℃保存。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

• 细胞组蛋白提取：
  
  • 提取液制备：
    每500μL蛋白提取液A中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物混匀后置冰上备用。
    注：
    ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
    ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需再次加入蛋白酶抑制剂。
    ● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
    
  • 收集5～10×10⁶个细胞，在4℃，1000×g条件下离心5～10分钟，吸干上清，收集细胞。
    
  • 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
    
  • 每5～10×10⁶个细胞中加入500μL蛋白提取液A，混匀后，在4℃条件下轻轻振荡10分钟。
    注：
    ● 震荡时用振荡器/摇床的较低转速，保持液体轻微晃动即可。
    ● 没有振荡条件也可不振荡，稍微延长提取液处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
    
  • 在4℃，16000×g条件下离心15分钟，弃上清。
    
  • 沉淀中加入100μL组蛋白提取液B。
    
  • 用200μL枪头反复吹打混匀或充分涡旋振荡混匀。
    
  • 置4℃冰箱过夜存放。
    
  • 16000×g条件下离心10分钟，收集上清。
    
  • 在上清中加入10～25μL试剂C充分混匀。
    
  • 加入上样缓冲液混匀后煮沸，分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验②。
    注：加入上样缓冲液液后应为上样缓冲液的蓝色，如果颜色变黄，可以再加入试剂C混匀，每次加入5μL，至恢复蓝色为止。
• 组织组蛋白提取：
  
  • 提取液制备：
    每500μL蛋白提取液A中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物混匀后置冰上备用。
    注：
    ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
    ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需再次加入蛋白酶抑制剂。
    ● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
    
  • 取100mg组织样本剪碎，加入蛋白提取液A，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
    
  • 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃条件下轻轻振荡10分钟。
    注：
    ● 震荡时用振荡器/摇床的较低转速，保持液体轻微晃动即可。
    ● 没有振荡条件也可不振荡，稍微延长提取液处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
    
  • 在4℃，16000×g条件下离心15分钟，弃上清。
    
  • 沉淀中加入100μL组蛋白提取液B。
    
  • 用200μL枪头反复吹打混匀或充分涡旋振荡混匀，置4℃冰箱过夜存放。
    
  • 16000×g条件下离心10分钟，收集上清。
    
  • 在上清中加入25μL试剂C充分混匀。
    
  • 加入上样缓冲液混匀后煮沸，分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
    注：加入上样缓冲液液后应为上样缓冲液的蓝色，如果颜色变黄，可以再加入试剂C混匀，每次加入5μL，至恢复蓝色为止。